一種簡單快速的miRNA檢測新方法
PCR和Northernblot是目前檢測單個miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高,但假陽性的憂慮和引物設計的困難限制了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測工具,但傳統的固相雜交技術程序復雜、時間漫長且操作不便。新出現的液相雜交技術檢測速度快,但需要特定的熒光信號檢測儀器。
方法改進:我們這里報道一種新的miRNA檢測方法:液相雜交顯色法(LHCD)。
這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標記的DNA探針進行液相雜交,接著用核酸外切酶消化多余的探針,再將雜交液點于尼龍膜上,之后ABC孵育,最后BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。
LHCD能夠區(qū)別miRNA家族成員間一個堿基的差異,其靈敏度可以達到2.5fmol,全過程耗時不到3個小時。本方法由于整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號放大系統(ABC)兩大技術,不但實現了miRNA的簡單、快速、高靈敏度檢測,其可視化的信號目測,還省去了昂貴的信號檢測儀。此外,本方法簡單的操作流程,使其容易學習和方便使用。
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