理想的三聚氰胺檢測方法
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一些奶農將牛奶稀釋以增加利潤，尤其是在技術發(fā)展緩慢、牛奶生產的利潤率并未隨效率的提高而增加的地方。這種稀釋行為使得牛奶質量下降，蛋白質、脂肪以及糖的濃度顯著降低。一些奶農稀釋牛奶的程度高達30%，隨后使用三聚氰胺掩飾這種欺詐行為。質量控制設備檢測的是正常水平的氮元素（蛋白質含有的），三聚氰胺中高含量的氮能夠在檢測中蒙混過關，讓造假的牛奶作為優(yōu)質產品通過檢測，從而顯著地增加利潤。
三聚氰胺與三聚氰酸結合后（通常見于三聚氰胺廢渣中的一種雜質）在體內聚集，形成不溶晶體，產生嚴重的毒性。氰尿酸三聚氰胺吸收進入血液，在腎臟微管的尿液中聚集并發(fā)生作用。隨后結晶，形成大量球形黃色晶體，堵塞并損傷微管中的腎臟細胞，導致嚴重的腎功能障礙。接觸時間延長則會導致其他健康問題，例如生殖損傷、膀胱或腎結石、以及癌癥。食品中蛋白質含量的標準檢測方法是凱氏定氮法以及杜馬斯燃燒法，兩種方法測定的都是氮的含量。這些方法不能將三聚氰胺的氮與氨基酸中天然存在的氮元素區(qū)分開來。已經有高靈敏度的方法用于檢測三聚氰胺，而不是測定氮元素。液相色譜（LC）可以單獨使用，或是與串聯(lián)質譜結合使用（LC/MS/MS），還可以將氣相色譜與串聯(lián)質譜結合使用（GC/MS/MS）。
這些色譜方法非常精確，但對于設備和操作而言，準備及運行的成本都非常高。因此迫切需要一個簡單的高通量篩選方法，以合理的成本精確檢測牛奶中三聚氰胺的殘留量。
經典的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）測量可以作為一個理想的解決方案。這種方法可以在微孔板中進行，因此樣品數(shù)量較多時可以同時進行，儀器成本也不高。已經開發(fā)了免疫測定試劑盒，可以高效、簡便、靈敏地檢測乳制品、動物飼料以及寵物食品的原料中的三聚氰胺污染物。
本文是關于如何使用簡便的ELISAs ，高靈敏地篩選牛奶樣品中的三聚氰胺。這些檢測需要具備足夠的靈敏度，檢出10礸以下的三聚氰胺，這是全世界的監(jiān)管機構對非嬰兒類食品設定的界限。
經典的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）測量可以作為
一個理想的解決方案來測定三聚氰胺含量。
本研究中，使用了兩種來自不同生產商、但是基本原理相同的三聚氰胺ELISA商品試劑盒。未知樣品以及辣根過氧化物酶（HRP）標記的三聚氰胺均置于三聚氰胺抗體包被的微孔板孔中。HRP標記的三聚氰胺與未知樣品中的三聚氰胺競爭結合抗體。結合率相當于HRP標記物與游離三聚氰胺的濃度比。因此，與抗體結合的HRP標記物的量與樣品中游離三聚氰胺的數(shù)量反向相關。
結合階段之后，使用微孔板清洗機去除未結合的物質，加入HRP顯色底物。測定的HRP酶活與HRP標記的三聚氰胺的數(shù)量成正比，并且與未知樣品中三聚氰胺的濃度有關。規(guī)定的孵育時間之后中止反應，測定形成的有色染料的量。如果樣品中不存在三聚氰胺，通過形成的有色染料的數(shù)量及較高吸收值可以得知酶活水平較高。未標記的游離三聚氰胺的量增加，則活力水平和吸收值降低。因此根據(jù)校準曲線（隨后討論）就可以直接測定三聚氰胺的濃度。
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